ELISA试剂盒的温育常选用的温度有4℃、室温、37℃、43℃等。其中37℃是试验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。一般来说两次抗原抗体反应通常在37℃约1～2小时，产物的生成可达顶峰。为加速反应，可提高反应的温度，有些