转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内 ALT浓度远高于血清，肝细胞破坏后血清 ALT立即迅速升高，因此谷 ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

   丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙酮酸与 NADH经 LDH催化生成 NAD+，上述方法实际为 ALT速率法，其反应公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。丙酮酸+NADH⁺H⁺→L-乳酸+NAD+。

在上述偶联反应中 NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在 340nm处吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min)与 ALT活性呈正比，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、蒸馏水

2、比色杯、分光光度计或自动分析仪

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品：

①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃保存 1个月有效，用于 ALT/GPT的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保存 1个月有效，用于 ALT/GPT的检测。

③(选做)样品准备完毕后可以用 BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 ALT/GPT含量。

2、分光光度计检测：

按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。注意：由于酶促反应时间极短，Leagene建议立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在 1～2min内，其后反应趋于平缓。Leagene对照检测参考值在 1～3min变化为 1.1～0.8之间。由于检测仪器、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同，参考值范围会有波动如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少；对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加。

3、生化分析仪检测：

按照下表设置主要参数，如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

计算：

分光光度计计算公式：

ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(945/45)=ΔA/min×3376

式中：6220=NADH的吸光度

945=反应液的总体积(μl)

45=待测样品体积(μl)

生化分析仪计算公式：

ALT(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(315/15)=ΔA/min×3376

式中：ΔA/min=测定的340nm吸光度的升高速率

6220=NADH的吸光度

315=反应液的总体积(μl)

15=待测样品体积(μl)

参考范围：

成年健康人血清 ALT：0～40U/L

性能指标：

空白吸光度值≥1.0

空白测定值≤5U/L

线性范围：0～1000U/L

批内 CV<6.0%

批间相对 CV<10%

灵敏度：10U/L

注意事项：

1、抗坏血酸 ≤40mg/dl ，游离胆红素 ≤40mg/dl ，结合胆红素 ≤40mg/dl ，血红蛋白≤500mg/dl对测定结果无影响。

2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。

3、血清中 ALT活性在室温可以保存 2天，4℃保存 1周，-20℃保存 1个月。

4、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存；打开包装以后，4℃保存 1个月。