红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz小体等检测,高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用 Schumm法 ,其检测原理是在有足够的 NADPH存在下,高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白,当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时,由磷酸戊糖代谢途径生成的 NADPH的数量足以完成上述还原反应当红细胞内 G6PD含量不足或缺乏时,高铁血红蛋白还原速度减慢,甚至不能还原,高铁血红蛋白呈褐色,用分光光度计在 635nm波长处检测。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
试剂(A): Hb抗凝剂 | 10ml | 4℃ |
试剂(B): Hb Assay Buffer | 1ml | -20℃ |
试剂(C): Hb显色液 | 1ml | 4℃避光 |
试剂(D): G6PD Buffer | 20ml | 4℃ |
使用说明书 | 1份 |
自备材料:
1、离心管或试管
2、水浴锅或恒温箱
3、96孔板
4、酶标仪
操作步骤(仅供参考):
1、取新鲜静脉血 0.9ml,加入 Hb抗凝剂 0.1ml,充分混匀。
2、低速离心 15min,取出,调整血细胞与血浆比例为 1:1后再混匀。
3、取上述抗凝血 200μl,加入 Hb Assay Buffer和 Hb显色液各 10μl,颠倒混匀 15次,使与氧气充分接触,加塞或密封后放置于 37℃水浴锅或恒温箱中孵育 3h。混匀,取上述血液 4μl加入 G6PD Buffer 200μl。上述操作,可见下表:
加入物(μl) | 空白管 | 测定管 |
抗凝血 | 200 | 200 |
Hb Assay Buffer | - | 10 |
Hb显色液 | 10 | 10 |
混匀,放置于 37℃水浴锅或恒温箱中孵育 3h。 | ||
取上述反应液 | 4 | 4 |
G6PD Buffer | 200 | 200 |
4、混匀,室温放置 2min,用酶标仪 635nm处测定空白管、测定管吸光度,分别命名为SA和 B。
5、向空白管加入 Hb Assay Buffer 10μl,混匀,室温放置 5min,用酶标仪 635nm处再次测定空白管吸光度命名为ST。
计算:
高铁血红蛋白还原率(%)={1-(SA-B)/(ST-B)}×100%
参考区间:一般应超过 75%
注意事项:
1、红细胞比容低于 30%时,高铁血红蛋白还原率显著下降,需调整红细胞与血浆的比例。
2、样本不应有凝血或溶血,以免影响测定。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。