测定原理:
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
试剂组成(50T/48 样):
提取液:液体 50ml×1 瓶,4°C保存;
试剂一:液体 50ml×1 瓶,4°C保存;
试剂二:液体 32ml×1 瓶,4°C保存;
试剂三:液体 16ml×1 瓶,4°C避光保存;
试剂四:液体 16ml×1 瓶,4°C保存;
试剂五:液体 2.5ml×1 瓶,4°C避光保存。
需自备试剂于仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿、蒸馏水。
样本前处理:
样本前处理详见试剂盒内说明书。测定细菌、组织和细胞时需要测定蛋白浓度。
检测步骤:
| 试剂 | 空白 | 测定 |
| 样品(ml) | 0.6 | |
| 蒸馏水(ml) | 0.6 | |
| 试剂一(ml) | 0.6 | 0.6 |
充分震荡混匀
| 试剂二(ml) | 0.6 | 0.6 |
10000g,4°C,离心 10min,去上清,留沉淀
| 蒸馏水(ml) | 0.6 | 0.6 |
10000g,4°C,离心 10min,去上清,留沉淀
| 试剂一(ml) | 0.3 | 0.3 |
| 试剂三(ml) | 0.3 | 0.3 |
充分震荡混匀
| 试剂四(ml) | 0.3 | 0.3 |
10000g,4°C,离心 10min,取上清 0.8ml 加入试管中
| 试剂五(ml) | 0.04 | 0.04 |
混匀,室温静置 5min,波长 665nm,1ml 玻璃比色皿,空白管调零,
测定各管在 665nm 下吸光度值(A665),记为 A 测定和 A 空白,ΔA=A 测定-A 空白