赛百慷(上海)生物技术股份有限公司
原代细胞培养体系配置方法
原代代培养体系一般由以下四种(三种)组成:
名称体积保存条件
基础培养基500ml 4℃、避光
添加剂5ml -20℃、避光
胎牛血清(FBS) 0-50ml -20℃、避光
双抗(青霉素/链霉素,P/S) 5ml -20℃、避光
添加剂和双抗通常浓度为100X(100 倍工作浓度)。血清的添加比例有0%(不添加),1%(5ml),
2%(10ml),5%(25ml),10%(50ml)几种。
第一次使用时先将-20℃保存的添加剂、双抗、FBS 转移到4℃溶解后,在灭菌后的百级洁净
等级环境中操作,所使用的容器和移液耗材均需要进行过无菌处理。
首先将解冻的FBS、添加剂和双抗进行分装,平均分装成5-10 份,留下本次配制所需要的量,
剩余的继续放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制完全培养基,避免反复冻融。
建议用无菌的50ml 离心管盛装配置好的完全培养基。
配制方法:在每个50ml 离心管中加入①500ul 添加剂、②500ul 双抗、③50×血清百分比
ml 的胎牛血清、④(50×(1-血清百分比)-1)ml 的基础培养基。配制完成后盖上盖子,
颠倒混匀备用。
例如:在血清比例为5%的条件下,50ml 离心管中各组分的体积分别为:
基础培养基:(50×(1-5%)-1)=46.5ml+添加剂:500ul +双抗:500ul+血清:50×5%=2.5ml
配置好的培养基置于4℃避光保存。由于添加剂中有很多重组蛋白,易发生降解,故配置好
的完全培养基有效期仅为3-4 周,请尽快使用。因此建议每次配制1-2 管(50-100ml),当然
使用量大的情况下也可以适量增加配置量。
P. S.:不建议客户将全部的血清、双抗、添加剂直接加入基础培养中混匀使用,原因如下:
1.500ml 的基础培养基的体积较大,灌装时体积波动很大,直接加入,无法准确地控制因子
和血清的工作浓度。
2. 配制好的培养基仅能在4℃保存3-4 周,如果期间没用完,继续使用会影响培养效果。
如果是-20℃保存,可以延长保存时间,但是反复冻融也会影响完全培养基的效果。
3. 如果使用培养基时由于操作失误导致污染,分装能减少培养基的损失量。