细胞简介

人角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

公司实验室分离的人角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态**

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

操作流程

细胞接收处理：

稳定培养4小时后，根据细胞密度决定换液或传代。

若细胞悬浮或部分悬浮，需离心后重悬于含15%血清的培养基，继续培养2-3天观察贴壁情况。

传代操作（贴壁细胞示例）：

四步消化法（推荐用于难消化细胞）：

弃旧培养基，用新培养基轻柔洗涤1-2次去除死细胞。

加入少量培养基吹打，收集贴壁不牢的细胞。

加入0.3ml胰酶润洗后弃去，再加入1ml胰酶消化至细胞间隙明显。

立即终止消化，吹打后分瓶培养。

培养操作规范

细胞接收后需立即检查是否漏液，静置2-4小时稳定状态。复苏时需37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于新鲜培养基。传代建议在80-90%汇合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存需配制含10%DMSO的冻存液，采用程序降温后转入液氮保存。所有操作需严格无菌，建议在二级生物安全柜内完成。

质量检测与注意事项

细胞需确保不含有HIV-1、HBV、HCV等病原体及支原体污染。运输方式可选择干冰冻存（-80℃保存不超过1个月）或常温培养瓶运输。收到细胞后需3天内反馈异常情况，操作失误或非推荐培养体系导致的细胞问题不予重发。特别注意：该细胞仅限科研使用，禁止用于临床治疗。
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