判断细胞核分离是否成功，关键在于验证纯度和完整性，避免胞质污染。以下是具体方法：

一、验证分离纯度(避免交叉污染)

‌蛋白质印迹(Western Blot, WB)‌：

‌原理‌：利用特异性抗体检测细胞核和胞质中的标志性蛋白(内参)。

‌操作‌：分别提取分离后的胞质和胞核组分蛋白，进行WB检测。

‌判断标准‌：

‌成功分离‌：胞质组分中‌仅‌检测到胞质内参(如GAPDH、β-actin)，胞核组分中‌仅‌检测到胞核内参(如Lamin B1、Histone H3)。

‌失败标志‌：胞质组分中检测到胞核内参，或胞核组分中检测到胞质内参，表明存在交叉污染。

二、观察细胞核形态与完整性

‌光学显微镜观察‌：

‌染色方法‌：常用‌台盼蓝‌染色或‌甲苯胺蓝‌染色。

‌台盼蓝染色‌：活细胞核拒染台盼蓝(无色)，死细胞核或破损核被染成蓝色。高比例的蓝色细胞核提示分离过程中损伤严重。

‌甲苯胺蓝染色‌：可使细胞核内的染色质着色，便于观察核膜是否完整、染色质分布是否均匀。

‌电子显微镜观察‌：

提供更高分辨率的图像，可直接观察核膜、核孔等超微结构是否完整，是评估核完整性的金标准之一。

三、其他辅助鉴定方法

‌酶活力测定‌：检测细胞核特有酶的活性，可间接反映核的纯度和功能状态。

‌定量分析‌：使用BCA法等测定蛋白浓度，评估得率。

‌总结‌：最可靠的方法是‌WB验证内参分布‌，结合‌显微镜观察形态‌。WB是金标准，显微镜可快速评估样本状态。