驼乳塑化剂(DBP)快速检测试剂盒
使用说明书

（货号：Ounuo95002）

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被邻苯二甲酸二正丁酯抗原，样本中的残留物邻苯二甲酸二正丁酯将和酶标板包被的抗原竞争邻苯二甲酸二正丁酯抗体，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物邻苯二甲酸二正丁酯的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物邻苯二甲酸二正丁酯的含量。

二、试剂盒特性

u  试剂盒灵敏度：   30ppb

u  孵育温度：       25℃

u  孵育时间：       15min～15min

u  样本检测下限

液态奶··· 30ppb

牛、羊乳粉·210ppb

u  交叉反应率

邻苯二甲酸二正丁酯·· 100%

u  样本回收率

液态奶···· 90% ±30%

牛、羊乳粉·· 90% ±30%

三、所用仪器、试剂

具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、天平（感量0.01g）。

微量移液器：单道 20µl～200µl、单道100µl～1000µl、多道 30～300 µl。 

试      剂：纯化水。

四、样本前处理步骤

1.样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

2. 样本前处理需配制：

配液  洗涤液

将20X浓缩洗涤液与纯化水按1：19比例稀释后混合均匀。

3. 样本处理：

（a）液态奶

1、 取100ul均质后的样本，加入400ul样本稀释液，充分震荡；

2、 取下层液体用于分析。

样本稀释倍数:  1倍

（b）牛、羊乳粉

1、 取1g均质后的样本，加入6ml纯化水，充分震荡；

2、 取100ul稀释后的样本，加入400ul样本稀释液，充分震荡

3、 取下层液体用于分析。

样本稀释倍数: 7倍

五、 酶标免疫分析程序:

（1）测定前应须知：

1、 使用前将需用试剂和板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、 使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、 在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。

（2） 操作步骤：

1、 从2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。

2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

4、 加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加入酶标记物50µl/孔，再加入抗体工作液50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀。25℃环境中反应15min。

5、 将孔内液体甩干，用已稀释的洗涤液250µl/孔洗板4～5次，每次间隔15～30秒，用吸水纸拍干（拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6、 显色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜封板，25℃环境中避光显色15min。

7、 测定：加入终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，5min内读数），测定每孔OD值。